产品说明

GenMute^TM转染试剂是一种新型的可被降解的多聚物转染试剂，细胞培养液中的血清和抗生素不影响转染。siRNA，miRNA，DNA都可使用GenMute^TM转染试剂转染常见的哺乳动物细胞，或是用于siRNA/DNA，DNA/miRNA共转染。

 

一、siRNA转染步骤

1、1X转染缓冲工作液的配制 将5X转染缓冲液用无菌ddH2O配制成1X转染缓冲工作液；1X转染缓存工作液常温保存24月有效。

注意：如果将GenMute^TM转染缓冲液（5X）保存于4ºC，可能会有白色沉淀出现，但并不影响转染效率。当配制成1X转染缓冲工作液，白色沉淀消失。

2、转染前一天（18h~24h）将细胞接种于六孔板，使第二天转染时细胞达到50%满。

注意：此例以六孔板为例，对于其他类型的细胞培养板/皿，请参考表1。

3、转染前30~60 min，去除原培养液，换1ml新鲜完全培养液（含血清和抗生素）。

4、对于每一个孔，将10~80 pmoles siRNA（终浓度10~80nM）加入100ul转染缓冲工作液（1X），涡旋混匀。

5、将4 ul GenMute^TMsiRNA转染试剂加入步骤4中溶液，用移液器混匀。

6、将转染混合物室温放置15min。

注意：室温放置最长时间不要超过30min。

7、将混合物逐滴加入到六孔板中的一个孔中，轻轻晃动混匀。放入培养箱。

8、5h后，去除转染培养液，换2ml新鲜完全培养液。

9、转染后24h~72h检测siRNA沉默效率（将转染试剂加入到孔中时间记为0h），通常转染48h~72h后会有比较好的沉默效果。

 

二、siRNA/DNA共转染步骤

1、1X转染缓冲工作液的配制 将5X转染缓冲液用无菌ddH2O配制成1X转染缓冲工作液；1X转染缓存工作液常温保存24月有效。

注意：如果将GenMute^TM转染缓冲液（5X）保存于4ºC，可能会有白色沉淀出现，但并不影响转染效率。当配制成1X转染缓冲工作液，白色沉淀消失。

2、转染前一天（18h~24h）将细胞接种于六孔板，使第二天转染时细胞达到50%满。

注意：此例以六孔板为例，对于其他类型的细胞培养板/皿，请参考表2。

3、转染前30~60 min，去除原培养液，换1ml新鲜完全培养液（含血清和抗生素）。

4、对于每一个孔，将10 pmoles siRNA（终浓度10nM）和1ug DNA加入100ul转染缓冲工作液（1X），涡旋混匀。

5、将4ul GenMute^TMsiRNA转染试剂加入步骤4中溶液，用移液器混匀。

6、将转染混合物室温放置15min。

注意：室温放置最长时间不要超过30min。

7、将混合物逐滴加入到六孔板中的一个孔中，轻轻晃动混匀。放入培养箱。

8、5h后，去除转染培养液，换2ml新鲜完全培养液。

9、转染后24h~72h检测siRNA沉默效率（将转染试剂加入到孔中时间记为0h），通常转染48h~72h后会有比较好的沉默效果。