RNA干扰技术服务简介

 

RNA干扰（RNA interference, RNAi）是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默，是一种特异性的转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing and transgene silencing)。由于RNAi具有高度的序列专一性和有效的干扰，可以特异地将特定的基因沉默，从而获得基因功能丧失或基因表达量的降低。RNAi技术可广泛应用到包括基因功能，药物靶点筛选，细胞信号传导通路分析等研究中。一般可将RNAi分成三类：siRNA、microRNA、shRNA.

慢病毒载体具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点，因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、以及活体动物实验中。

 

技术优势

由本公司经验丰富的研究人员利用慢病毒构建shRNA载体，可以高效稳定的运送进实验室常见的细胞系，并且也可用于感染传统转染试剂难以转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。

 

技术难点

由于实验涉及短发夹RNA（shRNA）的设计以及慢病毒的包装，实验步骤复杂繁琐，容易出现问题的环节比较多，特别是病毒包装过程中要注意的生物安全问题。慢病毒包装由本公司多年慢病毒包装经验的博士研究人员负责。

 

服务信息

服务项目	收费标准	实验周期
基于慢病毒的shRNA构建	询价	视具体情况而定
细胞稳定株筛选	询价	视具体情况而定

客户提供：沉默基因的种属、名称或者将目的基因的mRNA序列发给我们；如需要建立基因沉默后稳定细胞株筛选，需提供相应的靶细胞系。

公司提供：电子版实验报告及相关制品。

 

实验案例

说明：构建的慢病毒Raptor shRNA、Rictor shRNA、S6K1 shRNA、4E-BP1 shRNA感染SH-SY5Y和PC12细胞沉默细胞Raptor、Rictor、 S6K1、4E-BP1表达

 

说明：构建的慢病毒Raptor shRNA、Rictor shRNA、S6K1 shRNA、4E-BP1 shRNA感染Daudi和WEHI-231细胞沉默细胞Raptor、Rictor、S6K1、4E-BP1表达

 

CRISPRs/Cas9基因组编辑服务

 

CRISPR/Cas9（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats）是基因组编辑（genome editting）领域重要的突破。是在Cas9 DNA切割酶与sgRNA（small guidance RNA）共同作用下，将基因组进行定点改变的技术，主要应用于建立稳定的knockout细胞系，动物模型，用于疾病通路、药物作用机理等方面的研究。

 

技术优势

本公司具有多名熟练操作CRISPR/Cas9基因组编辑的博士研究人员，能够为您提供专业方便的基因组编辑服务。

 

技术难点

由于实验涉及gRNA的设计以及慢病毒的包装，实验步骤复杂繁琐，容易出现问题的环节比较多，特别是病毒包装过程中要注意的生物安全问题。慢病毒包装由本公司多年慢病毒包装经验的博士研究人员负责。

 

服务信息

服务项目	收费标准	实验周期
CRISPRs/Cas9质粒构建	询价	2周左右
体外转录sgRNA	询价	2周左右
慢病毒包装	询价	视具体情况而定
在靶细胞中进行敲除效果分析	询价	视具体情况而定
建立knockout细胞系	询价	视具体情况而定

客户提供：

1、请将需敲除基因的DNA序列和靶位点发送给我们，我们会根据您的实验要求，与您确认实验方案并指导您提供样品。

2、我们免费为您设计gRNA，通常建议您一次合成2-3个。

3、进行CRISPRs/Cas9质粒构建，若需要使用特殊载体，请您提供、质粒量≥5 μg。

公司提供：电子版实验报告及相关制品。

 

实验案例

说明：CRISPR/Cas9编辑敲除Ulk1的PC12细胞