epMute^TM siRNA转染试剂是一种通用、高效的siRNA转染试剂。能够有效的将siRNA单独转染或siRNA/DNA共转染到常见的哺乳动物细胞中。对于大多数常见的贴壁细胞或原代细胞，使用该转染试剂，5nM的siRNA就能使目的基因下调90%，对于较难转染的细胞，推荐转染50nM的siRNA。细胞培养液中的血清和抗生素不影响转染。

一、siRNA转染步骤

1、1X转染缓冲工作液的配制 将5X转染缓冲液用无菌ddH2O配制成1X转染缓冲工作液；1X转染缓存工作液4度或常温保存12月有效。

注意：如果将PepMuteTM转染缓冲液（5X）保存于4ºC，可能会有白色沉淀出现，但并不影响转染效率。当配制成1X转染缓冲工作液，白色沉淀消失。

2、转染前一天（18h~24h）将细胞接种于六孔板，使第二天转染时细胞达到50%满。

注意：此例以六孔板为例，对于其他类型的细胞培养板/皿，请参考表1。

3、转染前30~60 min，去除原培养液，换1ml新鲜完全培养液（含血清和抗生素）。

4、对于每一个孔，将5/50 pmoles siRNA（终浓度5/50nM）加入100ul转染缓冲工作液（1X），用移液器混匀。

5、将2.4-4 ul PepMuteTMsiRNA转染试剂加入步骤4中溶液，用移液器混匀。

6、将转染混合物室温放置15min。

注意：室温放置最长时间不要超过30min。

7、将混合物逐滴加入到六孔板中的一个孔中，轻轻晃动混匀。放入培养箱。

8、5h后，去除转染培养液，换2ml新鲜完全培养液。

9、转染后24h~78h检测siRNA沉默效率（将转染试剂加入到孔中时间记为0h），通常转染48h~72h后会有比较好的沉默效果。

二、siRNA/DNA共转染步骤

1、1X转染缓冲工作液的配制 将5X转染缓冲液用无菌ddH2O配制成1X转染缓冲工作液；1X转染缓存工作液常温保存12月有效。

注意：如果将 PepMuteTM转染缓冲液（5X）保存于4ºC，可能会有白色沉淀出现，但并不影响转染效率。当配制成1X转染缓冲工作液，白色沉淀消失。

2、转染前一天（18h~24h）将细胞接种于六孔板，使第二天转染时细胞达到70%满。

注意：此例以六孔板为例，对于其他类型的细胞培养板/皿，请参考表2。

3、转染前30~60 min，去除原培养液，换1ml新鲜完全培养液（含血清和抗生素）。

4、对于每一个孔，将5 pmoles siRNA（终浓度5nM）和0.5ug DNA加入100ul转染缓冲工作液（1X），上下颠倒混匀。

5、将3ul PepMuteTMsiRNA转染试剂加入步骤4中溶液，用移液器混匀。

6、将转染混合物室温放置15min。

注意：室温放置最长时间不要超过30min。

7、将混合物逐滴加入到六孔板中的一个孔中，轻轻晃动混匀。放入培养箱。

8、5h后，去除转染培养液，换2ml新鲜完全培养液。

9、转染后24h~72h检测siRNA沉默效率（将转染试剂加入到孔中时间记为0h），通常转染48h~72h后会有比较好的沉默效果。