组分和说明
本产品的滴度≥2×10^9 pfu/ml。如果按照20 MOI感染6孔板的细胞，每孔50万细胞计算，200ul

本产品共可以感染40个孔；如果按照20 MOI感染24孔板的细胞，每孔10万细胞计算，200ul

本产品共可以感染200个孔。如果MOI值提高，则相应可以感染的孔数会减少；如果MOI值降低，则相应可以感染的孔数会增加。

保存条件
-80℃保存，一年有效；-20℃保存，1-2个月内有效；4℃保存，一周内有效。

LC3B简介

LC3B被认为是细胞自噬中的标志性蛋白。LC3B是一个具有125个氨基酸残基的蛋白，在蛋白合成后，被Atg4所酶切而失去了C端的22个氨基酸蛋白，从而暴露出C端的甘氨酸，人们把它命名为胞质形式的LC3B I。在细胞自噬的过程中，其C端暴露的甘氨酸经过一个类似泛素化的过程，以ATG7为E1样激活酶(E1-like activating enzyme)， 以ATG3为E2样连接酶(E2-like conjugation enzyme)，以Atg12-Atg5-Atg16复合物为E3样连接酶(E3-like ligase)，在C端甘氨酸上共价连接上磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine,PE)而成为LC3B-PE即LC3B II。与胞质定位的LC3B I不同，LC3B II定位于自噬体(autophagosome)的内膜和外膜上。在自噬体与溶酶体融合后，自噬体外膜上的LC3B II被Atg4所酶切，而自噬体内膜上的LC3B II则被溶酶体内的蛋白酶所降解。尽管LC3B II比LC3B I的分子量要大，但由于其极强的疏水性，在SDS-PAGE电泳时，LC3B II比LC3B I迁移得更快，其表观分子量分别为14kD和16kD。在用GFP-LC3B腺病毒感染细胞后，在非自噬的情况下，荧光显微镜下GFP-LC3B以弥散的形式存在于细胞质中；而在自噬的情况下，荧光显微镜下GFP-LC3B则聚集在自噬体膜上，以斑点的形式表现出来(LC3B dots or punctae)。

附录：
1. 腺病毒使用安全规范
a. 作为一种相对安全的病毒，尽管腺病毒基因组在感染后不会整合进入宿主细胞基因组中，也不会在细胞体内进行复制，但是仍然具有可能的潜在生物学危险。我们建议使用者在病毒操作前应仔细阅读本规范，并在实验中严格按照本规范的要求进行操作。更为严格的美国CDC的生物安全等级及其操作与防护要求参考附表1，也可以访问如下网页：http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/BMBL5_sect_IV.pdf。
b. 腺病毒操作时应使用相应级别的生物安全柜，不同的腺病毒的生物安全等级会有所不同。如果使用普通超净工作台操作病毒，请不要打开排风机，以尽量避免可能污染病毒的尘埃正面吹向操作人员而被吸入。
c. 实验操作时必需佩戴一次性帽子、口罩，穿戴实验手套及专门的实验服，避免身体直接接触病毒。手部及面部有开放性创口时，禁止进行病 毒操作。
d. 操作病毒时需小心谨慎，不要产生气雾或飞溅。如果操作时超净工作台或其它器皿上有病毒污染，请立即用70%乙醇或2%SDS溶液擦拭干净，或者采取其它的妥善措施。
e. 如果需要离心，应使用密封性好的离心管，或用封口膜密封后离心，最好使用专门的离心机。
f. 用显微镜观察细胞感染情况时应遵从以下步骤：拧紧培养瓶或盖紧培养板，用70%乙醇清理培养瓶或培养板外壁后到显微镜处观察拍照。离开显微镜实验台之前，用70%乙醇擦洗显微镜实验台。
g. 所有被病毒污染过的枪头、离心管、培养板(皿、瓶)、培养液、手套等，在丢弃前请用84消毒液或2%SDS浸泡过夜。
h. 脱掉手套后，用肥皂或洗手液清洗双手。
2. 病毒MOI的计算
MOI (Multiplicity of Infection)定义：病毒感染细胞时，病毒数量与细胞数量的比值。

Pfu (Plaque forming units)定义：具有生物活性的病毒颗粒数量。

可以根据如下公式计算所需pfu：

所需pfu=细胞数量×MOI

例如，需要向1×10^5细胞中加入20 MOI的病毒，即所需pfu=(1×10 ^5cells)×(20 MOI)=2×10 ^6pfu。若病毒母液滴度为1×10^9pfu/ml，则细胞培养液中应加入(2×10^6pfu)/(1×10p^9fu/ml)=0.002ml病毒母液，即2μl病毒母液。