组分和使用说明

本产品的滴度≥10⁸TU

1、将细胞均匀等量地种在60 mm培养皿，一个作为对照（培养皿1），一个用以感染病毒（培养皿2），每个皿3 ml细胞培养液；

2、当培养皿中细胞长至约80%密度时，吸去培养液，培养皿1换上2.5 ml新鲜培养液，培养皿2换上1 ml新鲜培养液并加入1.5 ml病毒液，同时加入8 mg/ml Polybrene以提高病毒感染效率；

3、24 h后重复步骤2；

4、第二次感染病毒24 h后，两个培养皿均分别加入2 mg/ml Puromycin保持48 h以筛选感染成功的细胞，显微镜下观察两个培养皿中死亡细胞情况，通常培养皿1中细胞几乎全部杀死，而培养皿2中只部分杀死或未被杀死。移去培养皿2中含死细胞的培养液，加入新鲜培养液培养。待存活的细胞长起来后，转移至培养瓶进一步扩大培养用于实验。

5、收集细胞做Western blotting鉴定，若与对照相比，筛选得到的细胞S6K1表达量减少≥90%，说明成功建立了下调/沉默S6K1的细胞株。

注意事项

1、避免反复冻融，反复冻融会降低病毒滴度。病毒融解后，如果在一周内使用，可以放置于4℃。如果-80℃保存时间超过一年，可能会导致滴度下降，此时建议加大病毒感染量或感染次数。

2、慢病毒相关实验请在生物安全柜（BL-2级别）内操作。

3、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

4、为了您的安全和健康，操作病毒时请穿实验服，佩戴口罩和手套，尽量不要裸露双手及手臂的皮肤。

5、操作病毒时特别小心病毒溅出。如果操作时超净工作台有病毒污染，请立即用 70%乙醇加1%的SDS溶液擦拭干净。接触过病毒的枪头、离心管、培养板、培养液请于84消毒液浸泡后统一处理。

6、如需要离心，应使用密封性好的离心管，如有必要请用封口膜封口后离心。

7、病毒相关的废弃物需要特殊收集，统一经高温灭菌处理。