（AD1005）Ad-S6K1-wt 说明书

产品简介

重组腺病毒表达带有HA标签的野生型S6K1 (Recombinant adenovinses expessinghemagglutinin (HA)-tagged wild-type S6K1, Ad-S6K1 wAd-S6K1)。

S6K1,即核糖体蛋白S6激酶1 (ribosomal protein S6 kinase 1, S6K1) ,是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)下游的:个重要效应蛋白，属AGC家族成员之- ,具有丝苏氨酸激酶活性。S6K1 的底物主要包括40S核糖蛋白S6、IRSI、預凋亡蛋白BAD、真核起始因子(eIF4E)、真核延伸因子(eEFZK)和CAMP反应原件调控因子(CREB)。S6K1主要分布于细胞核及细胞质中，介导细胞蛋白合成、mRNA加工、葡萄糖的动态平衡、细胞生长及存活等过程。

腺病毒感染细胞后为瞬时表达,通常不会与基因组DNA重组，不能用于筛选稳定细胞株。本产品感染体内外细胞后，有效表达时间通常不少于7天，不同细胞和组织的有效表达时间有所不同。感染10-14天后蛋白的表达很可能会大大减弱。

使用说明

1. 感染条件的确定：

不同种类的细胞感染所需的MOI值是不同的，如果是初次使用腺病毒感染需要通过实验确定最佳的感染条件。

a. 细胞培养(以6孔板Hela细胞为例，其它培养板或培养皿参考6孔板进行操作)：感染前一天在6孔板中以5×10^5/孔接种Hela细胞，每孔加入2ml完全培养液(具体的接种数量由细胞大小和细胞生长速度而定)，使第二天病毒感染时细胞密度达到约70%左右。

b. 按照MOI 分别为2、5、10、20、40，计算所需病毒量，计算方法请参考附录。

c. 冰上解冻病毒，混匀后备用。

d. 从细胞培养箱中取出6孔板，在显微镜下确定每孔的细胞均生长良好.分别加入特定MOI值的病毒液，同时设置未加入病毒的细胞孔作为对照组。对于培养液体积比较小的多孔板，例如96孔板和48孔板，也可以先把病毒用培养液稀释至所需的MOI值后再加入。

e. 感染后约12h，除去含有病毒的培养液，每孔加入2ml新鲜的完全培养液，继续培养24h后，收集细胞做western，或提取mRNA做qPCR。以不显著影响细胞生长、并由较强蛋白表达的MOI值为最佳条件。

2. 感染细胞

根据步骤1. 获得的最佳MOI进行感染实验。