使用说明
一、 悬浮细胞
1、 用去离子水稀释10×Wash buffer至1×Wash buffer工作液。
2、 收集细胞，800 g离心5 min，去除上清液，然后用500 μl的1×Wash buffer Wash buffer工作液清洗细胞1次，离心弃上清液。
3、 加入适量的1×Wash buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度至106/ml。
4、 取适量90 μl的细胞悬液至新的EP管中，加入10 μl的MDC Stain染色，轻轻混匀。
5、 37℃避光染色10～30 min。
6、 离心（800 g，5 min），去除上清液，收集细胞用500 μl的1×Wash buffer清洗细胞2次，离心弃上清液。
7、 加入100 μl的Collection buffer重悬细胞，取适量（建议10~30 μl）滴加于载玻片上并加盖玻片。
8、 荧光显微镜下观察（激发滤光片波长355 nm，阻断滤光片波长512 nm），拍照、荧光强度分析或计数每个细胞中的自噬体数量。
二、贴壁细胞（适用于12孔板，对于使用6孔板各试剂用量需加倍）
1、 用去离子水稀释10×Wash buffer至1×Wash buffer工作液。
2、配制MDC stain染色工作液（1×Wash buffer：MDC=10:1）
3、含有细胞的培养板每孔加入500 μl 1×Wash buffer清洗细胞1次，然后移去清洗液。
4、每孔加入100 μl MDC stain染色工作液，37℃避光染色10-30 min。
5、用500 μl 1×Wash buffer清洗细胞2次，移去清洗液。
6、加入100 μl/孔Collection buffer。
7、荧光显微镜下观察（激发滤光片波长355 nm，阻断滤光片波长512 nm），拍照、荧光强度分析或计数每个细胞中的自噬体数量。
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