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产品描述
增强型BCA蛋白浓度测定试剂盒(Enhanced BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。其检测浓度下限达到10μg/ml，最小检测蛋白量达到0.2μg，待测样品体积为1-20μl。且显色速度快，相同的样品孵育较短时间即可进行吸光度测定。在20-1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。本产品从0.025到0.5mg/ml的标准曲线参考图1。
图1. 本试剂盒蛋白标准曲线的效果图。左图为加入BCA工作液后37ºC分别孵育30、60和120分钟后的吸光度实测效果图，右图为37ºC孵育60分钟时的实拍显色效果图。图中数据仅供参考，实际的检测效果可能会略有不同。
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使用说明
1. 蛋白标准品的准备
a. 取1.2ml蛋白标准配制液加入到一管蛋白标准(30mg BSA)中，充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白标准溶液。配制后可立即使用，也可以-20ºC长期保存。
b. 取适量25mg/ml蛋白标准，稀释至终浓度为0.5mg/ml。例如取20µl 25mg/ml蛋白标准，加入980µl稀释液即可配制成0.5mg/ml蛋白标准。蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9% NaCl或PBS稀释标准品。稀释后的0.5mg/ml蛋白标准可以-20ºC长期保存。
2. BCA工作液的配制
根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。例如5ml BCA试剂A加100µl BCA试剂B，混匀，配制成5.1ml BCA工作液。BCA工作液室温24小时内稳定。
3. 蛋白浓度检测
a. 将标准品按0、1、2、4、8、12、16、20µl加到96孔板的标准品孔中，加标准
品稀释液补足到20µl，相当于标准品浓度分别为0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。
b. 加适当体积样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足20µl，加标准品稀释液补足到20µl。请注意记录样品体积。
c. 各孔加入200µl BCA工作液，37ºC放置20-30分钟。
注: 也可以室温放置2小时，或60ºC放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。
d. 用酶标仪测定A562，或540-595nm之间的波长的吸光度。
e. 根据标准曲线和使用的样品体积计算出样品的蛋白浓度。
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注意事项
1、室温保存。蛋白标准配制成溶液后-20℃冻存。
2、BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20、60、80。但本试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇(DTT)低于1mM，β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol)低于0.01%。不适用BCA法时建议试用善本生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
3、需酶标仪一台，测定波长为540-595nm之间，562nm最佳。需96孔板。如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但测定时，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大BCA工作液的用量使不小于最小检测体积，样品和标准品的用量可相应按比例放大也可不变。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
4、为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热，但是切勿过热。
5、本产品仅用于专业人员的科学研究用。
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
