（AD1011）Ad-PTEN-wt 说明书

产品描述

重组腺病毒表达野生型PTEN ( Recombinant adenoviruses expressing wild type PTEN,Ad-PTEN-wtAd-PTEN)。

PTEN ( phosphatase and tensin homolog deleted fromchromosome 10, PIEN),其全称是与张力蛋白同源在10号染色体有缺失的磷酸酶基因。PTEN基因编码的蛋白在胞质中表现出双重特异性磷酸酶活性，是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因。PIEN具有调节细胞生长、增殖、迁移、分化等多种效应。

腺病毒感染细胞后为瞬时表达,通常不会与基因组DNA重组,不能用于筛选稳定细胞株。本产品感染体内外细胞后，有效表达时间通常不少于7天，不同细胞和组织的有效表达时间有所不同。感染10-14 天后蛋白的表达很可能会大大减弱。

使用说明
1.感染条件的确定:不同种类的细胞感染所需的MOI值是不同的，如果是初次使用腺病毒感染需要通过实验确定最佳的感染条件。

1.1细胞培养(以6孔板HeLa细胞为例，其它培养板或培养皿参考6孔板进行操作) :感染前1天在6孔板中以5x105孔接种HeLa细胞，每孔加入2 ml完全培养液(具体的接种数量由细胞大小和细胞生长速度而定)，使第2天病毒感染时细胞密度达到约70%左右。

1.2 按照MOL分别为2、5、10、20、40，计算所需病毒量，计算方法请参考附录。

1.3 冰上解冻病毒，混匀后备用。
1.4从细胞培养箱中取出6孔板，在显微镜下确定每孔的细胞均生长良好,分别加入特定MOI值的病毒液，同时设置未加入病毒的细胞孔作为对照组。对于培养液体积比较小的多孔板，例如96孔板和48孔板，也可以先把病毒用培养液稀释至所需的MOI值后再加入。1.5 感染后约12 h,除去含有病毒的培养液， 每孔加入2 ml新鲜的完全培养液，继续培养24h后，收集细胞做Westem bloting,或提取mRNA做qPCR.以不显著影响细胞生长、并由较强蛋白表达的MOI值为最佳条件。

2.感染细胞:根据步骤1获得的最佳MOI进行感染实验。