实验步骤
（一）通用操作步骤
在96孔板每孔加入100 ml细胞悬液；
在培养箱中预培养细胞；
向培养板中加入药物 (如果不加药物，直接进行第五步操作)；
在培养箱中培养一段时间；
向每孔加入10 ml的CCK-8溶液；
将培养板在培养箱内孵育1～4 h（根据具体实验优化）；
用酶标仪测定在450 nm处的吸光度。
（二）制作标准曲线（测定细胞具体数量时）
先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个重复孔。
接种后培养2-4 h使细胞贴壁，然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间）。
（三）细胞活性检测
在96孔板中接种细胞悬液（100 μl/孔）。将培养板放在培养箱中预培养（37°C、5% CO2）。
向每孔加入10 μl的CCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，否则会影响OD值读数）。
将培养板在培养箱内孵育1-4 h，然后用酶标仪测定450 nm处的吸光度。
如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 μl 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并使培养板室温避光保存。在24 h内吸光度不会发生变化。
（四）细胞增值-毒性检测
使用方法（以96孔板为例，其他规格培养板按实际情况安排）：
1. 在96孔板中配置100 μl的细胞悬液（通常细胞增殖实验每孔加入100 μl 2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100 μl 5000个细胞。具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖
速度的快慢等因素决定）。按照实验需要，进行预培养24 h（37°C、5% CO2）。
2. 向培养板加入1-10 μl不同浓度的待测药物刺激。
3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48 h）。
4. 每孔加入10 μl CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200 μl，则需加入20 μl CCK-8溶液，其他情况以此类推。可以用加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测，需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。
5. 在细胞培养箱内继续孵育1-4 h，通常孵育1 h就可以用酶标仪检测。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4 h分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。
6. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光度，如无450 nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600 nm的波长，例如650 nm，作为参考波长进行双波长测定。
7. 如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 μl 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并使培养板室温避光保存。在24 h内吸光度不会发生变化。
8. 注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
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