GenJetTM Plus DNA转染试剂是一种新型高效的DNA转染试剂。只能用于向哺乳动物细胞（包括原代细胞）中转染DNA（不能用于转染SiRNA）。细胞培养液中的血清和抗生素不影响转染。

 

一、通用转染步骤

1、转染前一天（18h~24h）将细胞接种于24孔板，使第二天转染时细胞达到70%-80%满。

注意：此例以24孔板为例，对于其他类型的细胞培养板/皿，请参考表1。

2、转染前30~60 min，去除原培养液，换新鲜完全培养液（含血清和抗生素）。

3、对于每一个孔，取一无菌的1.5ml离心管，向其中加入25ul不含血清（serum-free）的DMEM（High Glucose），再加入0.5ug质粒DNA，轻柔涡旋混匀或用移液器轻轻吹打三四次混匀。

4、再取一无菌1.5ml离心管，向其中加入25ul不含血清（serum-free）的DMEM（High Glucose），再加入1.5ul GenJetTM Plus DNA转染试剂，用移液器轻轻吹打三四次混匀。

注意： 不要使用Opti-MEM稀释GenJetTM Plus转染试剂和DNA，会影响转染效率

5、将步骤4溶液立即加入到步骤3溶液中，并轻柔涡旋混匀或移液器轻轻吹打三四次混匀。

注意：千万不要将步骤3溶液加入步骤4溶液。

6、室温放置10min。

注意：室温放置最长时间不要超过20min。

7、将GenJetTM Plus DNA/DNA混合物逐滴加入到24孔板中的一个孔中，轻轻晃动混匀。放入培养箱。

8、12h~18h后，去除转染培养液，换新鲜完全培养液（对于较敏感的细胞，为了降低细胞毒性，可在转染5h后更换培养液）。

9、转染后24h~48h检测转染效率（将转染试剂加入到孔中时间记为0h）。

二、改进型转染步骤（难转染细胞或原代细胞）

说明：对于难转染的细胞，按通用转染步骤转染效率低的，可按此步骤转染。对于一些不能被trypsin消化的原代细胞，直接跳过步骤2，在制备原代细胞的时候，离心后将原代细胞和转染复合物孵育。

1、转染前至少24h将细胞接种于六孔板，使第二天转染时细胞达到95%-100%满。

注意：此例以六孔板为例，对于其他类型的细胞培养板/皿，请参考表2。

2、转染前，去除原培养液，用trypsin/EDTA消化细胞，用完全培养液终止消化；计数细胞。

3、根据细胞计数的结果，对于六孔板的一个孔，离心1.0 X 10^6个细胞，150g，10min，室温。

4、离心后，将上清去除干净。

5、对于每一个孔，取一无菌的1.5ml离心管，向其中加入100ul不含血清（serum-free）的DMEM（High Glucose），再加入2ug质粒DNA，轻柔涡旋混匀或上下颠倒三四次混匀。

6、再取一无菌1.5ml离心管，向其中加入100ul不含血清（serum-free）的DMEM（High Glucose），再加入8ul GenJetTM Plus DNA转染试剂，轻柔涡旋混匀混匀。

注意： 不要使用Opti-MEM稀释GenJetTM Plus转染试剂和DNA，会影响转染效率

7、将步骤6溶液立即加入到步骤5溶液中，并立即轻柔涡旋混匀或或用移液器吹打三四次混匀。

注意：千万不要将步骤5溶液加入步骤6溶液。

8、室温放置15min。

注意：室温放置最长时间不要超过20min。

9、立即用7中溶液轻轻重悬4中离心后的细胞；于37ºC孵育20min

10、孵育完毕，将其接种到含有2ml预热的新鲜完全培养液的一个孔中，放入培养箱继续培养。

11、8h~12h后，去除转染培养液，换新鲜完全培养液。

12、转染后24h~48h检测转染效率（将转染试剂加入到孔中时间记为0h）。